高效液相色譜法的優(yōu)點(diǎn)和常見(jiàn)問(wèn)題？

作者：飛時(shí)達(dá)國(guó)際快遞公司

2022-09-28 15:29:58 閱讀數(shù)：1107

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??? 高效液相色譜法的主要優(yōu)點(diǎn)是：

??? （1）分辨率高于其他色譜方法
??? （2）速度快，十分鐘至十分鐘即可完成；

??? （3）高可重復(fù)性；
??? （4） HPLC柱可重復(fù)使用；

??? （5）全自動(dòng)操作，分析精度高。
??? 根據(jù)分離過(guò)程中溶質(zhì)分子與固定相相互作用的不同，高效液相色譜可分為液液色譜、離子交換色譜、液固色譜、和體積排除色譜四種基本類型。

??? 高效液相色譜法廣泛應(yīng)用于生物領(lǐng)域，用于以下產(chǎn)品的分離和鑒定：
??? （1）氨基酸及其衍生物；（2）有機(jī)酸；（3）抗生素；（4）生物堿；（5）核酸及其降解產(chǎn)物；（6）糖；（7）卟啉；（8）類固醇；9 .蛋白質(zhì)、酶和多肽；（10）脂質(zhì)等。

??? 高效液相色譜法常見(jiàn)的問(wèn)題有：
??? 1.
渦流擴(kuò)散
??? 當(dāng)流動(dòng)相與較大的固體顆粒碰撞時(shí)，就會(huì)產(chǎn)生渦流，就像流水與石頭碰撞一樣。如果柱內(nèi)填充不均勻，部分部位疏松或有細(xì)槽，流動(dòng)相速度快；如果某些部位結(jié)塊或安裝緊密，流動(dòng)就會(huì)變慢，多條流動(dòng)路徑會(huì)快慢不一，會(huì)使區(qū)域變寬。

??? 2. 分子擴(kuò)散
??? 分子擴(kuò)散是指物質(zhì)分子從高濃度區(qū)域向低濃度區(qū)域的運(yùn)動(dòng)，又稱縱向分子擴(kuò)散。為了減少分子的擴(kuò)散，應(yīng)該使用小而均勻的固體顆粒進(jìn)行柱載。

??? 3.傳質(zhì)
??? 分離出的物質(zhì)應(yīng)在流動(dòng)相和固定相中平衡，形成窄帶。在液相色譜法中，溶質(zhì)分子在兩液相之間分布或在固相上吸附和解析需要一定的時(shí)間。

??? 4. 流動(dòng)相流量

??? 當(dāng)流速過(guò)低時(shí)，分子擴(kuò)散嚴(yán)重，特別是在氣相色譜中。如果將理論塔板的高度與流速繪制成曲線，則理論塔板的高度隨著流速的增加而迅速減小。當(dāng)達(dá)到最小值時(shí)，流速再次增大，理論塔板高度再次增大，傳質(zhì)起主要作用。
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